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硅膠色譜柱再生的方法是什么?

發布時間:2021-11-16      點擊次數:296
   1.硅膠色譜柱的平衡
    硅膠色譜柱由工廠測試后是保存在水中的。新柱應先使用10-20倍柱體積的甲醇沖洗硅膠色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡硅膠色譜柱,您就會在處理問題方面獲得的"補償",而且您的硅膠色譜柱的壽命也會變得更長!操作步驟:
  a.平衡開始時將流速緩慢地提高,用流動相平衡硅膠色譜柱直到獲得穩定的基線(緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低,則需要較長的時間來平衡)
  b.如果使用的流動相中含有緩沖鹽,應注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡;分析結束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。
  2.硅膠色譜柱的再生
  長期使用的硅膠色譜柱,往往柱效會下降(柱子的理論塔板數減低)??梢詫枘z色譜柱進行再生,在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。
  建議用來沖洗柱子的溶劑體積
  硅膠色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積
  125-4mm1.6ml30ml
  250-4mm3.2ml60ml
  250-10mm20ml400ml
  選擇再生方法:
  極性固定相(如Si,NH2*,DIOL基色譜填料)的再生:
  正庚烷→→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
  非極性固定相(如反相色譜填料RP-18,RP-8,CN等)的再生:水→乙腈→(或異丙醇)→乙腈→水
  注意:
  a.在對NH2改性的硅膠色譜柱進行再生時,由于NH2可能以銨根離子的形式存在,因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液完全流出稀硫酸可以用來清洗已污染的硅膠色譜柱,如果簡單的用有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質,在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
  3.硅膠色譜柱的維護
  a.使用預柱保護分析柱(硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度)
  b.大多數反相硅膠色譜柱的pH穩定范圍是2-7.5,盡量不超過該硅膠色譜柱的pH范圍
  c.避免流動相組成及極性的劇烈變化
  d.流動相使用前必須經脫氣和過濾處理
  e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,應在實驗完畢柱子沖洗干凈,并保存于甲醇或乙腈中
  f.氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕

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